NEXTflex ™ 18S ITS Amplicon-Seq Kit专为真核生物18S核糖体RNA（rRNA）基因ITS1和ITS2高变内源转录间隔区文库制备设计的一款试剂盒，检测真核群落中的组成，支持多重扩增子测序建库。该试剂盒兼容于Illumina Miseq测序平台双端测序。

Figure 1. 18SrRNA基因保守区和高变区

NEXTflex 18S ITS Amplicon-Seq Kit和NGS一起可以方便高效的检测真核群落的组成。

快速的18S分析

18S ITS 建库实验流程中涉及到2步扩增过程：利用定制的PCR引物，对目标ITS 区域进行初始PCR扩增；随后，连接测序barcodes后的第二次扩增。限定的磁珠纯化次数确保下游扩增子的回收率。

低PCR偏差，高目标序列读取率实验流程

NEXTflex 18S ITS Amplicon-Seq Kit 所得测序结果比传统18S 测序建库试剂盒要好，流程中采用2步PCR，以增加样本特异性index，减少扩增子测序中的目标序列脱靶率。

产品特点：

• 低PCR偏差和高目标序列读取率

• 快速18SITS1和ITS2文库制备的方案

• 低样品量-低至1ng的基因组DNA

• 灵活的barcode选择-多达384的独特barcodes可运用

• 测序引物都包含在此试剂盒中

• 匹配PE的Sciclone NGS和NGSx自动工作站

• 经IlluminaMiSeq测序平台验证

产品列表：

工作流程：

KIT CONTENTS

• NEXTFLEX® PCR Master Mix

• NEXTFLEX® 18S ITS PCR I Primer Mix

• NEXTFLEX® PCR II Barcoded Primer Mix

• Resuspension Buffer

• Nuclease-free Water

REQUIRED MATERIALS NOT PROVIDED

• 1 ng – 50 ng high-quality genomic DNA in up to 36 µL nuclease-free water for each library

• 96 well PCR Plate Non-skirted (Phenix Research, Cat # MPS-499) or similar

• Adhesive PCR Plate Seal (Bio-Rad®, Cat # MSB1001)

• Agencourt® AMPure® XP 5 mL (Beckman Coulter® Genomics, Cat # A63880)

• Magnetic Stand – 96 (Thermo Fisher® Scientific, Cat # AM10027) or similar

• Thermocycler

• 2, 10, 20, 200 and 1000 µL pipettes / multichannel pipettes

• Nuclease-free barrier pipette tips

• Vortex

• 80% Ethanol, freshly prepared (room temperature)

• Davey, M. P., Norman, L., Sterk, P., Huete-Ortega, M., Bunbury, F., Loh, B. K., . . . Smith, A. G. (2019). Snow algae communities in Antarctica – metabolic and taxonomic composition. New Phytologist. doi:10.1111/nph.15701